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PCR实验室的污染类型有哪些?该怎样预防呢?

发布者:admin 发布时间:2021-08-10 16:43 阅读:

  PCR实验室可以通过DNA基因追踪系统来掌握患者体内的病毒含量,具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是容易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。那么PCR实验室的污染类型有哪些?该怎样预防呢?
 
PCR实验室
 
  一、PCR实验室的污染类型
 
  1、样本间交叉污染
 
  标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染。标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染。有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。
 
  2、PCR试剂的污染
 
  主要是由于在PCR试剂配制过程中,由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
 
  3、PCR扩增产物污染
 
  这是PCR反应中最主要最常见的污染问题,因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/mL),远远高于PCR检测数个拷贝的极限,所以极微量的PCR产物污染,就可造成假阳性。
 
  4、实验室中克隆质粒的污染
 
  在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室,这个问题也比较常见。因为克隆质粒在单位容积内含量相当高,另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂,而且在活细胞内的质粒,由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力,其污染可能性也很大。
 
PCR实验室
 
  二、PCR实验室的防污染方法
 
  1、严格执行各区功能划分:
 
  试剂储存和准备区:贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备,以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
 
  标本制备区:核酸(RNA、DNA)提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作,应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
 
  扩增区:cDNA合成、DNA扩增及检测。
 
  扩增产物分析区:扩增片段的进一步分析测定,如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
 
  试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品,包括移液器等器具应专用,空气、物品流向依次为:试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区,不可逆行。
 
  2、清洁的实验用品:
 
  实验室自配试剂(去离子水、缓冲液等)和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。
 
PCR实验室
 
  3、正确的实验操作:
 
  实验应在超净工作台内进行,工作台内应放置PCR专用的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品。
 
  实验的过程中选择最合适尺寸的手套并能及时更换,在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套,以避免不同实验区交叉污染。
 
  装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心,将管壁及管盖上的液体离至管底,降低污染手套或加样器的风险;谨慎开启反应管,防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
 
  吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行,遵守“慢吸快打”原则,尽量一次性完成,忌多次抽吸,以避免气溶胶产生的交叉污染。
 
  PCR试剂建议小量分装,以减少反复冻融、重复取样次数;多样本PCR反应时,先配制反应混合液分装至反应管中,最后加入样本核酸,请勿同时开盖,尽量保证单人单管,实现完全闭管操作。
 
  实验试剂应与样品和PCR产物分开保存,不应放于同处。
 
  PCR扩增实验完成后及时将反应管取出,用一次性手套将产物反应管包裹丢弃,保证管盖紧闭。
 
  4、规范的实验设计:
 
  应遵循实验室内部质量控制的相关规定,实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照,全程质控实验过程,验证PCR反应的可靠性,并协助判断扩增系统的可信性。
 
PCR实验室
 
  以上就是PCR实验室的污染来源及防污染措施。更多实验室相关产品信息,敬请关注河南中润实验工程公司官网,产品咨询及实验室EPC设计建设请联系网站客服。